基于 NCBI 数据库 HTRA1 基因 mRNA 序列，设计靶向 HTRA1 的抗体 mRNA 序列；采用 AI 算法优化 αHTRA1 mRNA 编码序列，提升细胞内表达效率；体外转录合成 αHTRA1 重链、轻链 mRNA（图 2A）。优化后 mRNA 二级结构稳定，翻译效率显著提升（图 2B）。

将重链、轻链 mRNA 按 1:1 比例转染 PANC-1、SW1990 细胞，ELISA 检测显示，细胞上清中 αHTRA1 抗体分泌量随时间升高，48 h 达峰值（图 2C）。单转重链或轻链 mRNA 无明显抗体分泌，仅共转组可检测到高水平抗体，证实重链、轻链可有效组装为完整抗体（图 2D）。Western Blot 结果显示，转染 αHTRA1 mRNA 24、48 h 后，PANC-1、SW1990 细胞中 HTRA1 蛋白表达显著下调（图 2E）。综上，选择 24 h 作为后续实验标准化转染时间。

对 αHTRA1 mRNA 处理及未处理的 PANC-1 细胞进行 RNA 测序，共筛选出 150 个差异表达基因（DEGs），其中上调 107 个、下调 43 个（图 5A）。KEGG 通路富集分析显示，HIF-1 信号通路为显著富集通路（图 5B）。PDAC 典型特征为纤维增殖反应，形成致密纤维化炎症微环境，诱导缺氧、抑制免疫细胞功能；HTRA1 可激活 HIF-1 通路，推测 αHTRA1 mRNA 通过抑制 HIF-1 通路改善肿瘤微环境、阻断 PDAC 进展。

对 HIF-1 通路 DEGs 进一步分析显示，血红素氧合酶 1（HMOX1）、己糖激酶结构域 1（HKDC1）表达下调，乳酸脱氢酶 C（LDHC）表达呈下降趋势（图 5C）。qPCR 验证结果与测序结果一致（图 5D），证实 αHTRA1 mRNA 可通过抑制 HIF-1 信号通路调控 PDAC 肿瘤微环境。

提取 C57BL/6 野生型（WT）及 LSL-Kras^G12D/+;Pdx1-Cre（KC）小鼠胰腺原代腺泡细胞，成功构建三维胰腺类器官模型。培养过程中，腺泡细胞逐渐分化为导管细胞；KC 组类器官生长速率、导管结构大小、腺泡导管化生（ADM）数量及大小均显著高于 WT 组（图 6A）。

αHTRA1 mRNA 处理 WT、KC 类器官后，ELISA 检测显示抗体成功表达并分泌至上清液（图 6B），证实 mRNA 可有效递送并表达。对 0、4、7 天 WT、KC 类器官进行 RNA-Seq 分析，结果显示 KC 组类器官生长过程中 HIF-1 信号通路显著上调，证实该通路在 PDAC 发生发展中发挥关键作用（图 6C-6F）。

采用 HIF-1 抑制剂利非古特（YC-1）进一步验证 HIF-1 通路的关键作用。不同浓度 YC-1 处理 Panc02 细胞，CCK-8 实验确定 10 μM 为 YC-1 最佳有效浓度（图7A）。

培养初期（第 0 天）加入 YC-1，第 0、4、7 天观察显示，YC-1 处理后 WT、KC 类器官导管结构缩小，ADM 数量及大小显著减少（图 7B-7E）。阿尔辛蓝（AB）染色显示，WT 组仅观察到 ADM，KC 组因 Kras 突变出现少量胰腺上皮内瘤变（PanIN），证实 Kras 突变是驱动类器官向癌前病变转化的关键因素（图 7F、7G）。

CK19 - 淀粉酶（AMS）免疫荧光双染色显示，YC-1 处理组 AMS（腺泡标志物）表达上调、CK19（导管标志物）表达下调，HIF-1α 表达显著降低，证实抑制 HIF-1 通路可阻断胰腺类器官 ADM 进程、抑制 PDAC 发生（图 7H、7I）。