免疫检查点阻断（PD-1/PD-L1 抗体）总体缓解率不足 30%，耐药是主要瓶颈。癌细胞异常表达的 CD28 可稳定 PD-L1 mRNA 促进免疫逃逸，是潜在靶点，但传统 CD28 抑制剂会同时破坏 T 细胞必需的共刺激信号。

南开大学丁丹 / 曹雪涛团队在 Advanced Science 发表研究，巧妙利用癌细胞高表达 LPCAT 酶的代谢特征，用 16:0 LPC 修饰标准 LNP 构建 LPC-LNP 载体，可像 "特洛伊木马" 一样被癌细胞主动摄取，却几乎不被免疫细胞识别。

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将16:0 LPC（癌细胞Lands循环主要底物）等三种候选脂质分别掺入标准LNP，高通量筛选确定14摩尔比16:0 LPC为最优配方，命名为LPC-LNP。该纳米颗粒粒径约150nm、分布窄、封装效率近100%，在4T1细胞中siRNA摄取量较商业LNP提高4倍，转染效率提升19倍；机制上依赖网格蛋白/小窝蛋白内吞，且LPCAT沉默可阻断其摄取，证实通过Lands循环实现靶向。体内分布显示，LPC-LNP显著规避T细胞、B细胞、NK细胞、DC及TAMs的摄取，肿瘤细胞转染效率从9.5%提升至16.0%，且对免疫细胞无毒性，展现出优异的肿瘤靶向性和安全性。

图1.6:0 LPC修饰的LNP增强RNA摄取和癌细胞特异性.

LPC-LNP-Cd28在4T1细胞中显著降低Cd28 mRNA和蛋白(图2A,B)，效果与COM-LNP-Cd28相当。但COM-LNP-Cd28废除CD4⁺和CD8⁺ T细胞膜CD28，而LPC-LNP-Cd28完全不影响T细胞CD28(图2C,D)。体内实验中，4T1肿瘤接种后第10天起3次瘤内注射。分选CD45⁻EpCAM⁺肿瘤细胞，COM-LNP-Cd28和LPC-LNP-Cd28均同等敲低Cd28和Cd274(图2E,F)。但COM-LNP-Cd28降低肿瘤浸润CD4⁺ T细胞CD28，LPC-LNP-Cd28无影响(图2G)；两者对CD8⁺ T细胞CD28影响均小(图2H)。LLC模型中结果类似(图2I-L)。LPC-LNP-Cd28有效沉默癌细胞CD28，具有肿瘤选择性且不干扰T细胞CD28.

图2.LPC-LNP递送Cd28 siRNA选择性敲低癌细胞CD28.

在抗PD-1耐药的4T1 TNBC模型中，LPC-LNP-Cd28显著抑制肿瘤生长并延长生存，COM-LNP-Cd28与对照无差异(图3A,B)。LLC模型中LPC-LNP-Cd28同样有效，COM-LNP-Cd28无效(图3C,D)。B16F10"冷"肿瘤模型中LPC-LNP-Cd28强力抑制生长，COM-LNP-Cd28完全无效(图3E,F)。LPC-LNP-Cd28在多种模型中显示强效抗肿瘤能力，COM-LNP-Cd28失败归因于T细胞脱靶效应。

LPC-LNP-Cd28显著增加4T1和LLC肿瘤中浸润CD8⁺ T细胞数量，COM-LNP-Cd28无此效应(图4A)。其增强CD8⁺ T细胞活化(IFNγ⁺TNFα⁺)(图4B)、细胞毒性(Perforin⁺Granzyme B⁺)(图4C)和IL2表达(图4D)。CD4⁺ T细胞数量趋势增加但未达显著(图4E)，功能质量改善(IFNγ、TNFα、IL2升高)(图4F,G)。COM-LNP-Cd28同时敲低CD4⁺ T细胞CD28(图2G,K)，可能因此无法激活CD8⁺ T细胞[46]。Treg未改变(图4H)。NK和B细胞在4T1中趋势减少，LLC中无变化(图4I-K)。

髓系分析显示，LPC-LNP-Cd28促进cDC1积累(图4L)，与增强CD8⁺ T细胞功能一致[47]。cDC2在LLC中亦增加(图4M)。4T1中未改变单核细胞、TAMs或中性粒细胞(图4N-P)。LLC中COM-LNP-Cd28增加这些细胞，尤其中性粒细胞(图S8N-P)，与Treg增加一致，形成免疫抑制正反馈[48]。

图5. LPC-LNP瘤内递送Cd28 siRNA克服抗PD-1耐药性.

CyTOF分析显示联合治疗显著促进CD8⁺ T细胞和NK细胞积累，降低髓系细胞比例(图6B)。αPD-1单药未能刺激CD8⁺ T细胞进入肿瘤(图6B)。

淋巴细胞聚类获得13个簇。CD8⁺ T中，高表达IFNγ和Ki-67的活化簇(簇5)和高Granzyme B的细胞毒性簇(簇13)在联合治疗后显著富集(图6D,E)。LPC-LNP-Cd28单药增加IFNγ、CD69和Ki-67，联合治疗进一步增加(图6F)。Treg(簇1和3)联合治疗后升高，但KLRG1⁻/KLRG1⁺ Treg比例增加(图6G)，表明终末分化受阻[51]。CD4⁺ T中IFNγ和Ki-67增加(图6H)。DN T(簇11)亦增加(图6E)。

髓系聚类获得17个簇。cDC2(簇4、6)联合治疗后增加，簇4在LPC-LNP-Cd28单药后亦增加(图6J,K)。CD103⁺XCR1⁺ cDC1样簇7在LPC-LNP-Cd28单药和联合治疗后均升高(图6J,K)。CCR7⁺ DC(簇5)联合治疗后增加(图6J,K)。cDC1和CCR7⁺ DC的PD-L1和Arg1降低(图6L,M)。免疫抑制性TAM(簇11、13)和中性粒细胞(簇16、17)表达IL10和Arg1，联合治疗后减少(图6L,M)。TAM中PD-L1和Arg1降低(图6L,M)。单核细胞(簇12)在LPC-LNP-Cd28单药或联合治疗后增加(图6J,K)。联合治疗有效激活cDC1、CCR7⁺ DC和CD8⁺ T细胞，降低免疫抑制性髓系细胞，发挥协同抗肿瘤效应。

图6.LPC-LNP-Cd28联合抗PD-1治疗增强4T1肿瘤抗肿瘤免疫.

LPC-LNP通过16:0 LPC修饰首次实现无需抗体修饰的癌细胞特异性靶向，降低了合成复杂性和成本。其利用癌细胞LPCAT高表达特性，将纳米颗粒伪装为代谢燃料实现选择性摄取。COM-LNP-Cd28虽有效递送siRNA至癌细胞，但因同时损害CD4⁺ T细胞CD28而失败，突显了对不同细胞类型具有不同功能靶点进行精确递送的必要性。其他多面功能靶点如SIRPα也可能受益于LPC-LNP平台。LPC-LNP-Cd28将"冷"肿瘤转为"热"肿瘤，联合αPD-1通过降低癌细胞和髓系细胞PD-L1，阻碍Treg分化和Treg-髓系细胞正反馈回路，实现协同效应。

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参考文献：Chai Y, Wang K, Fang J, Jia S, Shi Y, Gao W, Liu X, Li J, Cui Z, Qian Y, Chen X, Ding D, Cao X. Tumor-Specific Delivery of CD28 siRNA via Lyso-PC C-16 Modified Lipid Nanoparticles Overcomes Anti-PD-1 Resistance by Remodeling Tumor Microenvironment. Adv Sci (Weinh). 2026 Jun 9:e76003. doi:10.1002/advs.76003. Epub ahead of print. PMID: 42261788.